产品货号:
ALH175
中文名称:
固定包埋组织DNA提取试剂盒
英文名称:
DNA extraction kit for extracting embedded tissue
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒适用于快速提取各种福尔马林固定和石蜡包埋组织DNA。通过独特裂解液热处理和蛋白酶K共同作用迅速裂解细胞释放出基因组DNA,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
- 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
- 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
- 快速,简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。
- 多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,长度可达30~50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
组分 | 50T | 100T |
平衡液 | 5mL | 10mL |
裂解液FTL | 11mL | 20mL |
结合液CB | 11mL | 20mL |
抑制物去除液IR | 25mL | 50mL |
漂洗液WB | 13mL | 25mL |
洗脱缓冲液EB | 15mL | 15mL |
蛋白酶K溶液(20mg/mL) | 1.5mL | 3mL |
吸附柱AC及收集管(2mL) | 50套 | 100套 |
保存:室温,有效期1年。
- 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
- 蛋白酶K保存在即用型甘油缓冲液中,常温运输。收到后,不超过25℃室温至少保存6个月,4℃保存12个月,-20℃保存2年。
- 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
- 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C或者类似离心机。
- 需要自备乙醇(需要准备100%/80%/60%/40%不同浓度)或者二甲苯。
- 实验前将需要的水浴先预热到37℃备用。
- 结合液CB和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
- 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保批pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
- 将组织切片放入离心管子,浸泡在二甲苯中脱蜡约30分钟(具体时间根据切片厚度调整)。
- 将切片依次放入100%乙醇/80%乙醇/60%乙醇/40%乙醇/去离子水,每个液体中浸泡10秒钟重新水化切片。
- 刚放入100%乙醇时,应该见到切片变白。
- 显微镜观察下,用刀片切下拟提取DNA的目标组织,放入预先称重的1.5mL离心管。再次称重,计算出切片组织重量。
- 在25~50mg组织中加入200μL裂解液FTL,再加入20μL的蛋白酶K溶液(20mg/mL),立即混匀,混匀后置37℃水浴过夜。
- 再加入10μL的蛋白酶K溶液(20mg/mL),混匀后55℃水浴1~2小时。
- 此步骤后,不应该见到粗大的组织颗粒了。
- 加入200μL结合液CB,立刻涡旋振荡20秒充分混匀后置70℃水浴10分钟。
平衡液预处理吸附柱备用:
使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤,具体方法参见前文“关于平衡液的使用” - 冷却后加入100μL异丙醇,立刻涡旋振荡30秒充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
- 用1毫升的枪头吸取混合物,将混合物加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13000rpm离心60秒,倒掉收集管中的废液。
- 如果有不溶组织物可能堵住枪头,可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物;如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去,该做法是为了去除不溶物,以免堵塞离心柱。
- 加入500μL抑制物去除液IR,12000rpm离心30秒,弃废液。
- 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm离心30秒,弃掉废液。
- 加入600μL漂洗液WB,12000rpm离心30秒,弃掉废液。
- 将吸附柱AC放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
- 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液EB (洗脱缓冲液事先在65~70℃水浴中预热效果更好),室温放置3~5分钟,12000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12000rpm离心1分钟。
- 洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于50μL,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
- DNA可以存放在2~8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
关于平衡液的使用
- 介绍:核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团,提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液,若不小心碰到,请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖,以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成,请加热至37℃使沉淀完全消失。
- 使用方法:取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中,吸取100μL的平衡液至柱子中。13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液,将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。
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